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核苷酸類似物N⁴-甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸用于高GC含量 DNA的PCR擴(kuò)增

采用標(biāo)準(zhǔn)的脫氧核苷三磷酸體系或體系中的dCTP部分或者全部被其N⁴甲基化類似物——N⁴甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸（N⁴me-dCTP）所代替的混合體系，用Taq DNA聚合酶進(jìn)行高GC含量DNA的PCR擴(kuò)增。用以上兩種反應(yīng)體系來擴(kuò)增一段高GC含量（GC 含量為78.9%）的DNA片段，含有N⁴me-dCTP的PCR體系擴(kuò)增出了高產(chǎn)量的目的片段，而包含標(biāo)準(zhǔn)核苷酸的反應(yīng)體系則產(chǎn)生了大量的非特異性擴(kuò)增。在對另一段高GC含量（GC含量為 80.6%）DNA的擴(kuò)增中，只有含有N⁴me-dCTP的PCR反應(yīng)體系所擴(kuò)增出的目的片段經(jīng)凝膠純化后進(jìn)行二次擴(kuò)增獲得了目的產(chǎn)物。在一個高GC含量模板的直接PCR的比較中，含有N⁴me-dCTP的反應(yīng)體系明顯地比含有各種有機(jī)添加劑的標(biāo)準(zhǔn)核苷酸體系表現(xiàn)出更好的擴(kuò)增效果，據(jù)報道這些有機(jī)添加劑（二甲基亞砜，甜菜堿，乙二醇）能夠解決一些DNA二級結(jié)構(gòu)研究中遇到的難題。在中等GC含量的DNA片段的PCR擴(kuò)增中，檢測到核苷酸類似物在合成每一個目的擴(kuò)增產(chǎn)物時的解鏈溫度（Tm）明顯地低于專一使用標(biāo)準(zhǔn)核苷酸合成相同擴(kuò)增產(chǎn)物時的Tm值。

原文：

Cyntia R. Flores-Juárez, Eva González-Jasso et al, PCR amplification of GC-rich DNA regions using the nucleotide analog N ⁴ -methyl-2´-deoxycytidine 5´-triphosphate. BioTechniques 61:175-182 (October 2016).